Gene kloning yaiku tumindak nggawe salinan, utawa klon, saka siji gene. Sawise gene diidentifikasi, turunan bisa digunakake ing akeh bidang riset biomedis lan industri. Rekayasa genetika minangka proses kloning gene dadi organisme anyar utawa ngganti urutan DNA kanggo ngganti produk protein. Teknik genetika gumantung ing kemampuan kita kanggo nindakake tata cara penting ing ngisor iki.
Reaksi Chain Polymerase
02 Sekatan Enzim
Panemon enzim sing dikenal minangka endonuklease larangan wis dadi penting kanggo engineering protein . Enzim-enzim kasebut ngecor DNA ing lokasi spesifik adhedhasar urutan nukleotida. Enzim beda enzim , sing bisa ngobong DNA ing situs sing béda, wis diisolasi saka macem-macem galur bakteri. Potong DNA kanthi enzim pembatasan mrodhuksi kathah fragmen cilik, kanthi werna-werna ukuran. Iki bisa dipisahake nggunakake gel elektroforesis utawa kromatografi.
03 Elektroforesis
DNA sing murni saka kultur sel, utawa ngurangi enzim batasan kasebut ora bakal digunakake yen kita ora bisa nggambarake DNA - yaiku, nemokake cara kanggo ndeleng apa sampeyan ngandhut extract utawa apa fragment ukuran wis dipotong. Salah siji cara kanggo nindakake iki yaiku dening gel electrophoresis. Gel wis digunakake kanggo macem-macem tujuan, saka ndeleng potong DNA kanggo ndeteksi sisipan DNA lan knockouts.
04 Nggabungake Dua Piece DNA
Ing panelitèn genetis, seringkali perlu kanggo ngubungaké rong utawa luwih saben lembaran DNA, kanggo nggawe untai rekombinan, utawa nutup untaian bunderan sing wis dipotong karo enzim pembatasan. Enzim sing disebut ligase DNA bisa nggawe ikatan kovalen antarane ranté nukleotida. Enzim DNA polimerase I lan polinucleotide kinase uga penting ing proses iki, kanggo ngisi kesenjangan utawa fosforilasi ujung 5 ''.
05 Seleksi DNA Cilik Pangrembakan
Bagéyan DNA cilik sing ora ana gunané, nanging bisa replikasi dhéwé, sing dikenal minangka plasmid. Plasmid asring digunakake minangka vektor kanggo ngeterake gen antarane mikroorganisme. Ing bioteknologi, sapisan gene kapentingan wis dikuatake lan loro gen lan plasmid dipotong dening enzim pembatasan, lagi dilinyati bebarengan ngasilake sing dikenal minangka DNA rekombinan. Viral (bacteriophage) DNA uga bisa digunakake minangka vektor, kaya kosmid, plasmid rekombinan sing ngandung gen bacteriophage.
06 Cara Munggah Vektor Ke Cell Host
Proses transfer material genetik ing vektor kayata plasmid, menyang sel inang anyar, diarani transformasi. Teknik iki mbutuhake sel-sel inang sing ngalami owah-owahan lingkungan sing ndadekake dheweke "kompeten" utawa sacara sementara ngelmu menyang vektor. Elektroporasi minangka salah sawijining teknik kasebut. Sing luwih gedhe plasmid, sing luwih murah efisiensin karo kang dijupuk dening sel. Segmen DNA sing luwih gedhe luwih gampang dikloning kanthi nggunakake bacteriophage, retrovirus utawa vektor virus utawa kosmid liya ing cara sing disebut transduksi. Phage utawa vektor virus asring digunakake ing obat regeneratif nanging bisa nyebabake penyisipan DNA ing bagian-bagian kromosom kita sing ora dikarepake, nyebabake komplikasi lan malah kanker.
07 Cara Milih Organisme Transgenik
Ora kabeh sel bakal njupuk DNA sak transformasi. Iku penting sing ana cara kanggo ndeteksi sing gedhe-gedhe sing nggawe. Umumé, plasmid mawa gen kanggo resistensi antibiotik lan sel transgenik bisa dipilih adhedhasar ekspresi gen kasebut lan kemampuan kanggo tuwuh ing media sing ngandung antibiotik kasebut. Metoda alternatif pilihan gumantung marang anané protési reporter liya kayata sistem x-gal / lacZ , utawa protein fluoresensi green, sing ngidini pemilihan sing adhedhasar werna lan fluoresensi.