Dikembangaké ing taun 1983, proses PCR wis nyiptakake urutan DNA kanthi urutan lan ngenali urutan nukleotida ing gen individu.
Cara iki nggunakake muter panas utawa pemanasan lan pendinginan ulang ing reaksi kanggo leleh lan replikasi DNA. Minangka PCR terus, DNA "anyar" digunakake minangka cithakan kanggo réplikasi lan reaksi rantai sing diarani, kanthi eksponensial nambahi cithakan DNA.
Teknik PCR ditrapake ing akeh bidang bioteknologi kayata engineering protein , cloning, forensics (fingerprinting DNA), testing paternity, diagnosis penyakit hereditaria lan / utawa infeksi, lan analisis sampel lingkungan.
Ing forensik, khususé, PCR utamané migunani amarga nguataké malah bukti DNA sing paling cilik. PCR uga bisa digunakake kanggo nganalisis DNA sing umure ewu taun, lan teknik iki wis digunakake kanggo ngenali kabeh saka mammoth 800.000 taun-lawas kanggo mumi saka saindenging jagad.
Prosedur PCR yaiku kaya mangkene:
- Inisialisasi: Langkah iki mung perlu kanggo polimerase DNA sing mbutuhake PCR panas. Reaksi dipanasake ing antarane 94 lan 96 ° C lan dianakake saben 1-9 menit.
- Denaturasi: Yen prosedur ora mbutuhake dhisikan, denaturasi minangka langkah pisanan. Reaksi dipanasake ing suhu 94-98 ° C kanggo 20-30 detik. Asam hidrogen cithakan DNA disrupted lan molekul DNA sing di-stranded digawé.
- Annealing: Suhu reaksi luwih murah tinimbang antarane 50 lan 65 ° C lan dianakake sajrone 20-40 detik. Primer anneal menyang cithakan DNA sing terdirus siji. Suhu banget penting sak langkah iki. Yen panas banget, sepisanan iki ora bisa diikat. Yen banget kadhemen, sepisanan bisa mbungkus cacat. Ikatan sing apik ditentukake nalika urutan primadona rapet karo urutan template.
- Extension / Elongation: Suhu ing langkah iki beda-beda gumantung marang jinis polimerase. Polimerase DNA nyintesis untai DNA sing anyar.
- Elongasi pungkasan: Langkah iki dilakoni ing 70-74 ° C kanggo 5-15 menit sawise siklus PCR final.
- Penahanan Final: Langkah iki opsional. Suhu bakal katahan ing suhu 4-15 ° C lan strop reaksi kasebut.
Prosedur iki dipérang dadi telung tahap:
- Amplifikasi exponential: Sajrone saben siklus, produk (potongan spesifik DNA sing ditiru) digodhog.
- Tahap level-level: Nalika polimerase DNA entuk kegiatan lan ngonsumsi reagen, reaksi bakal luwih alon.
- Plateau: Ora ana prodhuk liyane.