Carane endonuceleases iki ngadeg metu
Pinten sampeyan ngerti babagan enzim pembatasan? Njupuk pangerten luwih apik babagan apa sing dilakoni lan apa sing penting, kanthi review iki.
Defining Restriction Enzymes
Endonucleases minangka bagean saka enzim sing ngecor molekul DNA. Saben enzim ngenali urutan unik nukleotida ing untu DNA. Urutan kasebut biasane kira-kira 4 nganti 6 pasangan basa sing dawa. Urutan kasebut minangka palindromik amarga untaian DNA pelengkap nduwe urutan sing padha mung ing arah sebaliknya.
Ing tembung liya, loro untu DNA dipotong ing panggonan sing padha.
Endi Iki Enzim Ditemukan
Enzim pambates ditemokake ing macem-macem galur bakteri lan peran biologis kanggo melu ing pertahanan sel. Enzim-enzim kasebut mbatesi DNA manca (eg virus) sing entuk sel, kanthi ngancurake. Sèl inang duwé sistem modifikasi watesan sing methylates DNA dhewe ing situs tartamtu kanggo enzim watesan kasebut, saéngga nglindhungi saka pamindhahan. Luwih saka 800 enzim sing ditemokake wis ditemokake sing ngenali luwih saka 100 beda urutan nukleotida.
Gunakake ing Bioteknologi
Enzim pambates digunakake ing bioteknologi kanggo ngeculake DNA dadi lembaran cilik kanggo nyinaoni beda dawa pecahan antarane individu (Restriction Fragment Length Polymorphism - RFLP). Padha uga digunakake kanggo kloning gene.
Techniques RFLP wis digunakake kanggo nemtokake yen individu utawa kelompok individu duwe beda beda ing urutan gen lan pola pembatasan watesan ing wilayah tartamtu saka genome.
Kawruh babagan wilayah-wilayah unik iki minangka basis kanggo fingerprinting DNA . Saben cara iki gumantung marang nggunakake elektroforesis gel agarose kanggo pemisahan fragmen DNA. TBE buffer, sing kasusun saka basa Tris, asam boric, lan EDTA, umumé digunakake kanggo elektroforesis gel agarose kanggo nliti produk DNA.
Jinis-babagan Restriksi Enzim
Ana telung macem jenis enzim batasan. Tipe I ngeculake DNA ing lokasi kanthi acak minangka 1000 utawa luwih pasangan basa saka situs pangenalan. Tipe III ngethok ing kira-kira 25 pasang basis saka situs kasebut. Jinis-jinis I lan III mbutuhake ATP lan bisa dadi enzim sing akeh karo sub-unit. Enzim Tipe II, sing biasane digunakake ing bioteknologi, ngetokaké DNA ing urutan sing diakoni tanpa perlu ATP lan luwih cilik lan luwih gampang.
Enzim pambuwangan Tipe II dijenengi miturut spesies bakteri sing diisolasi. Contone, EcoRI enzim diisolasi saka E. coli . Umumé wong akrab akrab karo wabah E. coli ing panganan.
Enzim pambuwangan Tipe II bisa ngasilake rong jinis sing beda-beda gumantung manawa padha ngethok loro lembaran ing tengah urutan pangenalan utawa saben untaian sing nyedhaki siji ujung urutan pangenalan.
Potong mantan bakal ngasilake "ujung tusuk" kanthi ora ana overhang nukleotida. Sing pungkasan ngasilake "lengket" utawa "kohesif" amarga amarga saben fragmen DNA sing diasilake duwe overhang sing ngasilake pecahan liyane. Loro-lorone migunani ing genetika molekuler kanggo nggawe DNA rekombinan lan protein.
Iki wangun DNA sing metu amarga digawe dening ligation (ikatan bebarengan) saka rong utawa luwih beda helai sing ora asale ora ana hubungane.