Penyangga iki digunakake kanggo pemisahan elektroforesis DNA
Buffer TBE utamané migunani kanggo pemisahan fragmen DNA sing luwih cilik (MW <1000), kayata produk-produk enzim sing diwatesi .
TBE nduweni kapasitas buffering luwih gedhe lan bakal menehi resolusi sing luwih cetha tinimbang penyangga TAE . Penyangga TAE yaiku solusi sing diwangun saka basa Tris, asam asetat lan EDTA (Tris-acetate-EDTA).
TBE umume luwih larang tinimbang TAE lan nyegah ligase DNA, sing bisa nimbulaké masalah yen proses purifikasi DNA lan langkah-langkah ligasi ditrapake. Kanthi telung langkah sing prasaja, goleki carane nggawe buffer TBE. Sampeyan ora kudu njupuk luwih saka 30 menit kanggo nggawe buffer iki. Punika kepengin:
Siapke Solusi Stock saka EDTA
Larutan asam EDTA (etilenediamine tetraacetic) kudu disiapake luwih dhisik. EDTA ora bakal rampung dadi larutan nganti pH disetel dadi sekitar 8,0. Kanggo solusi stock 500-mililiter saka 0.5 M EDTA, bobot 93,05 gram EDTA disodium uyah (FW = 372.2). Banjur dissolve ing 400 mililiter deionisasi banyu lan nyetel pH karo NaOH. Sawisé iku, tutupake solusi ing volume akhir 500 mililiter.
Siapke Solusi Simpenan saka TBE
Gawe solusi stock stock konsentrasi (5x) saka TBE kanthi bobot 54 g Tris basa (FW = 121.14) lan 27,5 g asam borat (FW = 61.83) lan dissolving loro ing kira-kira 900 mililiter banyu deionisasi. Banjur nambah 20 mililitre 0,5 M EDTA (pH 8.0) lan nyetel solusi kanggo volume akhir 1 liter.
Solusi iki bisa disimpen ing suhu kamar nanging precipitate bakal mbentuk solusi lawas. Simpen buffer ing botol kaca lan discard yen precipitate wis kawangun.
Siapake Solusi Kerja TBE
Kanggo electrohoresis gel agarose, sawijining penyangga TBE bisa digunakake ing konsentrasi 0.5x (1:10 ngencerake stok konsentrasi). Dilukei solusi saham kanthi 10x ing banyu deionisasi. Konsentrasi solute Final yaiku 45 mM Tris-borate lan 1 mM EDTA. Penyangga saiki wis siap dienggo nganggo gel agarose .
Apa Sampeyan Perlu
Kanggo nggawe buffer TBE, sampeyan mung butuh papat bahan. Item sing isih ana ing daftar iki minangka peralatan. Asam pérak sing dibutuhaké yaiku EDTA disodium salt, Tris base, asam boric lan banyu deionisasi.
Kanggo peralatan, sampeyan kudu standar pH meter lan kalibrasi, manawa cocok. Saliyane iku, sampeyan butuh 600 mililiter lan bubuk 1500-milliliter utawa flasks. Babak babagan kabutuhan peralatan sampeyan yaiku silinder lulus lan nyithak bar lan nyampur piring.
Priksa persediaan ing lab sing bakal digunakake kanggo mesthekake sampeyan duwe kabeh sing perlu sadurunge sampeyan miwiti. Ora ana sing luwih elek tinimbang kudu mandheg ing tengah nyiapake solusi amarga sampeyan wis metu saka bahan sing tepat.
Yen laboratorium sampeyan ing sekolah utawa situs karya sampeyan, priksa kanthi personel sing bener kanggo ndeleng sing duwe kabeh barang ing stok. Mengkono uga bisa ngirit wektu lan energi ing pungkasan.