Carane Nggawe Buffering Imunohistokimia Iki
Phosphate buffered saline (PBS) iku solusi buffer sing umum digunakake kanggo pewarna immunohistochemical (IHC) lan asring digunakake ing riset biologi. PBS minangka larutan uyah berasas banyu sing ngandung natrium hidrogen fosfat, natrium klorida lan, ing sawetara kasus, kalium klorida lan kalium dihydrogen fosfat.
Pewarnaan Immunohistokimia
Immunohistochemistry nuduhake proses ndeteksi antigen kayata protein ing sel-sel bagian jaringan kanthi nggunakake prinsip antibodi sing mengikat khusus kanggo antigen ing jaringan biologi.
Pewarnaan immunofluoresensi adalah metode pewarnaan immunohistokimia pisanan.
Antigens bakal katon nalika dijangkepi karo antibodi nggunakake pewarna fluoresensi amarga reaksi pengikat antigen-antibodi Proses iki dumadi nalika diaktifake dening cahya sing khusus saka gelombang dawa spesifik ing mikroskop fluorescent.
Konsentrasi osmolaritas lan ion solusi sing cocok karo awak manungsa-isotonic.
Resep kanggo PBS
Sampeyan bisa nyiyapake PBS kanthi pirang-pirang cara. Ana pirang-pirang rumus. Sawetara wong ora ngandhut kalium, dene liyane ngandhut calcium utawa magnesium .
Resep iki relatif gampang. Iku kanggo 10X solusi Simpenan PBS (0.1M). Nanging, sampeyan uga bisa nggawe solusi stock 1X, utawa miwiti nganggo resep 10X lan dilute menyang 1X.
Proses kabeh njupuk kira-kira 10 menit.
Opsi kanggo nambah Tween uga kasedhiya.
Apa Sampeyan Bakal Nggawe Buffer PBS
- Sodium phosphate monobasic (anhydrous)
- Sodium phosphate dibasic (anhydrous)
- Sodium klorida
- Ukuran lan bobote
- Stirrer magnetik lan stir stir
- A pH probe sing dikalibrasi lan cocok solusi kanggo nyetel pH
- Botol volumetrik 1L
- Tween 20 (opsional)
Carane Priksa Fosfat Buffered Saline (PBS)
Bobot 10.9g bubuk natrium fosfat dibasic (Na2HPO4), 3.2g anhydrous sodium phosphate monobasic (NaH2PO4), lan 90g natrium klorida (NaCl).
Dissolve ing mung miturut 1L banyu disaring.
Nyetel pH menyang 7.4 lan nggawe solusi nganti volume akhir 1L.
Dilute 10X sadurunge nggunakake lan nyetel ulang pH yen perlu.
Sampeyan bisa nggawe solusi PBS sing ngandung 0,5 persen Tween 20 kanthi nambah 5mL Tween 20 kanggo solusi 1L.
Tip kanggo Nggawe PBS Buffer
Simpen buffer ing suhu kamar sawise sampeyan nggawe solusi PBS.
Reagent non-anhidrat bisa diganti nanging sampeyan kudu ngalkal ulang massa sing cocok saben kanggo nampung molekul banyu sing ditambahake.
Nggunakake Phosphate Buffered Saline (PBS)
Saline buffered fosfat duwe akeh kegunaan amarga isotonic lan non-beracun kanggo paling sel. Sampeyan bisa digunakake kanggo ngencerake zat-zat lan asring digunakake kanggo mbilas kontan sel. PBS bisa dianggo minangka cairan ing pirang-pirang cara kanggo ngetokake biomolekul amarga banyu molekul ing njero bakal disusun ing sekitar protein-protein, umpamane. Bakal "dikumbah" lan diobong menyang permukaan sing padhet.
PH tetep stabil lan konsisten kanggo nyegah karusakan saka sel.
Film banyu tipis sing ngiket inti kasebut nyegah denaturasi utawa owah-owahan konformasi liyane. Buffer karbon bisa digunakake kanggo tujuan sing padha nanging kurang efektifitas.
PBS uga bisa digunakake kanggo njupuk spektrum referensi nalika ngukur adsorpsi protein ing ellipsometry.